德克薩斯紅標記的番茄凝集素

【??參數信息】

英文名稱：Texas Red labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)

中文名稱：德克薩斯紅標記的番茄凝集素

規格：1mg

熒光顏色：紅色

應用：糖生物學、免疫熒光

糖特異性：[GIcNAc]1-3，N-乙酰葡萄糖胺

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

本產品德克薩斯紅標記的番茄凝集素具有適當數量的熒光染料，結合為該凝集素提供染色特性。

該綴合物基本上不含為綴合的熒光染料。激發在595nm，發射在615nm。

基本性質：

LEL是一種穩定的單亞基糖蛋白，由約50%的阿拉伯糖和半乳糖組成，在溶液中可能形成多聚體。

其糖結合特異性主要針對[GlcNAc]β1-3-N-乙酰葡糖胺，并能與血型糖蛋白和Tamm-Horsfall糖蛋白結合。

盡管與馬鈴薯凝集素、曼陀羅凝集素和麥胚凝集素有部分相似性，但其結合特性存在差異。

標記特性：

Texas Red是一種熒光染料，標記后形成LEL-熒光團偶聯物，呈亮紅色，激發波長約595 nm，發射波長約615 nm（與Texas Red濾光片兼容）。

偶聯物經過優化，染料結合比例適當，確保染色效果，且幾乎不含游離熒光染料。

【使用方法】

（一）使用前準備

試劑處理

溶解沉淀：若長期儲存后出現沉淀，需在37°C下加熱溶解（避免高溫破壞活性）。

離心去雜質：使用前以15,000 rpm、4°C離心30分鐘，去除顆粒物（尤其適用于細胞染色）。

稀釋溶劑：推薦用PBS（磷酸鹽緩沖液）稀釋，部分產品建議含0.2 mg/ml肝素（防止非特異性結合）。

濃度與稀釋

工作濃度：推薦5–20 µg/ml（根據實驗優化調整）。

儲存液濃度：商品化產品通常為1–2 mg/ml。

（二）實驗步驟

（1）組織切片染色（直接法）

樣本準備：

石蠟/冰凍切片脫蠟、水化，或新鮮組織切片固定（如4%多聚甲醛）。

染色操作：

將稀釋后的LEL-Texas Red（5–20 µg/ml）滴加于切片，覆蓋樣本。

避光孵育：室溫或4°C孵育5–45分鐘（時間依樣本類型調整）。

洗滌：

用冷PBS洗滌3次，每次5分鐘（去除未結合凝集素）。

封片與觀察：

封片劑（如VECTASHIELD®）封固，避光保存。

熒光顯微鏡檢測：激發波長 595–604 nm，發射波長 606–615 nm（紅色熒光）。

（2）血管灌注標記（活體/離體）

灌注液配制：

將LEL-Texas Red稀釋至5–20 µg/ml，溶于生理緩沖液（如PBS或人工腦脊液）。

灌注操作：

活體灌注：通過尾靜脈或心內注射注入嚙齒類動物，循環10–30分鐘。

離體灌注：離體器官灌注系統注入，確保均勻分布。

樣本處理：

灌注后取組織，制備切片或整體透明化（如ECi/EGi法）。

直接熒光觀察或進一步免疫染色。

（3）細胞染色（如原始生殖細胞PGCs）

細胞預處理：

血液/組織樣本用PBS洗滌，含肝素（0.2 mg/ml）防凝。

組織需yi酶分散（≤10分鐘，保留糖鏈結構）。

染色步驟：

細胞重懸于1/250稀釋的LEL-Texas Red（約8 µg/ml）中。

避光冰浴孵育5分鐘。

洗滌與分選：

加10倍體積冷PBS，1500 rpm離心5分鐘，重復兩次。

流式細胞儀分選（Ex/Em: 595/615 nm）或顯微觀察。

【相關試劑】

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。