【參數信息】
英文名稱：RiboGreen RNA檢測試劑
激發波長：500 nm
發射波長：525 nm
消光系數（EC）：67,000 cm?1M?1
量子產率（QY）：0.65
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
生產廠商：西安強化生物科技
【簡單概述】
RiboGreen RNA檢測試劑是一種超靈敏熒光核酸染料，可以用于溶液中RNA的定量檢測。
核心特點包括：
超高靈敏度：
可以檢測低至1 ng/mL的RNA濃度，比傳統紫外分光光度法（260 nm吸光度法）靈敏度高1000倍以上。
特異性與抗干擾性：
對RNA具有高親和力，且不受游離核苷酸、蛋白質、鹽離子等常見污染物影響，避免假陽性或假陰性結果。
應用場景：
適用于微量RNA樣本分析，如體外轉錄產物定量、Northern Blot、cDNA文庫構建、 逆轉錄PCR 及RNA測序前濃度校準等。
【標準操作流程】
（一）試劑準備
緩沖液配制：使用無核酸酶的1×TE緩沖液。20×TE儲存液需用DEPC處理水稀釋，并高壓滅菌去除DEPC。
工作液稀釋：
高范圍：1:200稀釋原液
低范圍：1:2000稀釋
關鍵注意事項：
使用聚丙烯塑料容器。
現配現用，避光保存≤3小時，長期儲存導致光降解。
DMSO原液使用前需平衡至室溫，防止吸水失效。
（二）標準曲線制備
RNA標準品：建議使用16S/23S rRNA，用TE稀釋至2 μg/mL。
梯度稀釋：
高范圍：從2 μg/mL稀釋至終濃度1,000–10 ng/mL。
低范圍：先稀釋至100 ng/mL，再梯度稀釋至50–2.5 ng/mL。
反應體系：等體積混合RNA標準品與工作液（如各100 μL），室溫避光孵育2-5分鐘。
（三）樣本檢測
預處理：若含DNA，需DNase消化，再用TE稀釋≥10倍降低鹽離子干擾。
檢測步驟：
樣本用TE稀釋至預期濃度范圍。
加等體積RiboGreen工作液，避光孵育2-5分鐘。
熒光檢測：激發480 nm/發射520 nm，儀器增益需根據標準曲線高點調整。
數據分析：扣除試劑空白熒光值，依據標準曲線計算RNA濃度。
（四）儀器選擇
微孔板讀數器：推薦200 μL反應體系（96孔板），檢測限200 pg RNA。
微量檢測儀：NanoDrop 3300僅需1 μL樣品，適合珍貴樣本。
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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。
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