試劑簡介
Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅（紅色）是用于標記和檢測活細胞細胞功能的熒光探針之一。Calcein Red, AM自身無熒光，具有細胞膜滲透性。
一旦進入細胞后，被細胞內酯酶水解為鈣黃綠素紅（Calcein Red），能與胞內鈣離子結合，產生強烈的紅色熒光（Ex/Em=560/574），用標準的TRITC/Cy3濾片設置檢測。
Calcein Red AM對濕度敏感，粉末保存要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存，且須緊緊密封蓋子，干燥保存。Calcein Red AM工作液須現配現用。
試劑信息
同義名：Calcein Red Acetoxymethyl ester鈣黃綠素紅乙酰甲酯；
分子量：1015.79
純度：≥95%（HPLC）
Ex/Em：560/574nm
溶解性：溶于DMSO（1~5mM）
儲存條件：-20℃避光干燥
Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅染色步驟
大多數實驗中Calcein Red AM的工作濃度為2-5μM。
由于不同細胞系的染色條件不同，初次實驗建議做梯度實驗，以確定Calcein Red AM的工作濃度，使用低探針濃度得到的熒光結果為篩選原則。
（1）取一管適量分裝的儲存液（1000×）置于室溫，至少回溫20min，低速離心后，用合適的緩沖液如PBS，HBSS-HEPES稀釋到1×染色工作液。
（2）對于貼壁細胞，先消化細胞，離心收集細胞（1000 rpm，3min）。對于懸浮細胞，直接離心收集細胞。
（3）去上清，用緩沖液清洗細胞2~3次，充分去除殘留的酯酶活性。
（4）用1/10細胞培養基體積的Calcein Red AM染色工作液重懸細胞，37℃孵育20min～1h。
（5）用PBS（或者其他緩沖液）洗滌細胞兩次去除多余染料。
（6）用含合適濾光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的儀器進行檢測。
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