花菁染料CY5.5標記刀豆球蛋白A

【參數信息】

英文名稱：Cy5.5 ConA；Concanavalin A-Cyanine5.5 ；Cyanine5.5-Concanavalin A

中文名稱：花菁染料CY5.5標記刀豆球蛋白A；菁染料Cy5.5-伴刀豆球蛋白A ；Cy5.5-刀豆凝集素A

吸收波長：650 nm

發射波長：670 nm

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】（花菁染料CY5.5標記刀豆球蛋白A）

CY5-ConA是由CY5染料標記的刀豆球蛋白A（Concanavalin A, ConA）。ConA是一種植物源凝集素，特異性結合糖蛋白和多糖的葡萄糖或甘露糖殘基。

CY5標記后，可用于研究糖類代謝、細胞表面糖鏈分布及糖蛋白定位。

結構說明:

CY5染料由共軛的花菁鏈組成，發射近紅外熒光（吸收波長650 nm，發射波長670 nm）。

ConA分子通過其可反應的氨基與CY5染料偶聯形成共價鍵。

標記后的ConA保留了糖結合特性和CY5的熒光性能，可用于熒光顯微成像或流式細胞術檢測。

其作用機制基于以下關鍵步驟：

特異性糖結合：ConA部分通過其四個亞基上的結合位點，特異性識別并結合細胞表面或溶液中的α-D-甘露糖吡喃糖和α-D-葡萄糖吡喃糖殘基。該結合需依賴二價金屬離子（如Ca2?和Mn2?）維持構象活性。

熒光標記與成像：CY5.5部分在近紅外光激發下發射強熒光信號（~710 nm），其長波長特性可有效穿透生物組織，減少自發熒光干擾，從而實現高對比度的成像。結合后，復合物可標記目標糖基化分子，用于動態觀察糖蛋白分布、細胞膜相互作用或藥物遞送過程。

應用延伸：在藥物研究中，Cy5.5 ConA可通過糖結合介導載體與細胞膜的相互作用，影響藥物釋放動力學或靶向遞送效率。此外，其高靈敏度和生物相容性使其適用于腫瘤成像、免疫調節研究等場景。

【關于Cy5.5 ConA的細胞與組織糖基化成像有什么原理和步驟？】

（一）成像原理

特異性結合：ConA是一種凝集素，能特異性識別并結合細胞表面或組織中的糖蛋白和糖脂上的甘露糖/葡萄糖殘基。

熒光信號生成：Cy5.5染料通過共價鍵（如NHS酯-胺反應）標記在ConA上，形成Cy5.5-ConA復合物。Cy5.5在近紅外區域發射熒光，具有組織穿透性強、自發熒光干擾少、信噪比高的優點。

應用優勢：適用于活細胞、固定細胞及組織切片的糖基化分布研究，尤其在腫瘤糖基化異常、免疫應答等生物過程中有重要應用。

（二）成像步驟（以細胞成像為例）

樣品準備：

將細胞培養于蓋玻片或培養皿中，融合度達70–80%。

用PBS（pH 7.4）輕柔洗滌細胞，去除培養基殘留。

探針處理：

將Cy5.5-ConA探針用緩沖液（如PBS或培養基）稀釋至工作濃度（通常為1–10 μg/mL）。

將探針溶液加入細胞樣品中，在37°C下孵育15–30分鐘，避免光照。

洗滌與固定：

用PBS洗滌細胞3次，去除未結合的探針。

如需固定，可用4%多聚甲醛處理10分鐘，后再用PBS洗滌。

成像與觀察：

使用熒光顯微鏡（如共聚焦顯微鏡）觀察，激發波長約675 nm，發射波長約695 nm。

分析熒光信號分布，評估糖基化水平及定位。

（三）組織成像注意事項

組織切片需進行脫蠟、水化及抗原修復處理。

后續步驟與細胞成像類似，但孵育時間可能延長至30–60分鐘以確保探針滲透。

【相關試劑】

Annexin V-iFluor 488標記

XFD514 tyramide AF514 酪胺

Amplite 熒光法丙二醇（MDA）定量試劑盒

6-ROX甘an酸 25 uM熒光法PCR檢測參照液

Cy5.5NS succinimidyl ester Cy5.5NS NHS酯

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Cyanine 7 bissuccinimidyl ester, potassium salt

Cyanine 7 monosuccinimidyl ester, potassium salt

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。