【??參數(shù)信息】(AF350標(biāo)記膜聯(lián)蛋白V)
英文名稱(chēng):Annexin V, Alexa Fluor 350 conjugate;AF350-Annexin V Conjugate;AF350 Annexin V
中文名稱(chēng):Alexa Fluor 350標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V;AF350-Annexin V 標(biāo)記物
Ex (nm):343
Em (nm):441
分子量:~36000
溶劑:Water
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】(AF350標(biāo)記膜聯(lián)蛋白V)
膜聯(lián)蛋白(Annexins)是一類(lèi)鈣離子依賴(lài)性磷脂膜結(jié)合蛋白家族。
其中,膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)作為細(xì)胞凋亡研究的關(guān)鍵工具,能夠特異性檢測(cè)細(xì)胞表面暴露的磷脂酰絲an酸(PS)——這一特征不僅是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志,也存在于其他形式的細(xì)胞死亡過(guò)程中。
在細(xì)胞凋亡過(guò)程中,磷脂酰絲an酸會(huì)從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)至外側(cè)。這種細(xì)胞表面PS的暴露是凋亡早期/中期的普遍指征,其可檢測(cè)時(shí)間早于細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的發(fā)生。
目前,細(xì)胞活性的監(jiān)測(cè)可通過(guò)多種參數(shù)實(shí)現(xiàn),而基于膜聯(lián)蛋白V-熒光染料偶聯(lián)物(Annexin V-dye conjugates)的PS外翻檢測(cè)法已成為凋亡監(jiān)測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。
XFD350標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V偶聯(lián)物與Alexa Fluor 350-Annexin V具有相同的分子結(jié)構(gòu),是目前的熒光標(biāo)記膜聯(lián)蛋白V探針之一,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡監(jiān)測(cè)。
優(yōu)勢(shì)
高靈敏度與特異性:通過(guò)結(jié)合外翻的PS,高效檢測(cè)早期凋亡細(xì)胞。
非放射性檢測(cè):提供安全、簡(jiǎn)便的凋亡檢測(cè)方法,無(wú)需放射性物質(zhì)。
快速簡(jiǎn)便的操作流程:染色與分析步驟簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間短。
廣泛的應(yīng)用范圍:適用于多種細(xì)胞類(lèi)型及實(shí)驗(yàn)條件。
【AF350 Annexin V是如何分析免疫細(xì)胞在炎癥或自身免疫疾病中的凋亡途徑的?】
(一)檢測(cè)原理
PS外翻:
正常細(xì)胞中PS分布于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè);凋亡早期,PS外翻至膜表面。AF350標(biāo)記的Annexin V在鈣離子存在下與PS高親和力結(jié)合,發(fā)射藍(lán)色熒光(激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)約346/442 nm)。
區(qū)分凋亡階段:
常與膜不透性染料聯(lián)用:
早期凋亡:Annexin V?/PI?
晚期凋亡/壞死:Annexin V?/PI?
活細(xì)胞:Annexin V?/PI? 。
(二)實(shí)驗(yàn)步驟(以流式細(xì)胞術(shù)為例)
細(xì)胞制備:
分離病變組織或外周血中的免疫細(xì)胞,用預(yù)冷PBS洗滌后重懸于含Ca2?的結(jié)合緩沖液。
染色孵育:
加入AF350 Annexin V和PI,避光室溫孵育15分鐘。
流式檢測(cè):
使用流式細(xì)胞儀,AF350熒光通過(guò)紫外或紫色激光通道檢測(cè),PI通過(guò)FL2或FL3通道檢測(cè)。
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