AF488四聚乙二醇二苯并環辛炔基

【參數信息】

英文名稱：AF488 PEG4 DBCO

中文名稱：AF488四聚乙二醇二苯并環辛炔基

Ex (nm)：499

Em (nm)：520

狀態：綠色固體

溶解性：易溶于DMSO

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】（AF488四聚乙二醇二苯并環辛炔基）

Alexa Fluor488 PEG4 DBCO是一種綠色熒光染料偶聯物，含有DBCO反應基團，可通過銅自由點擊化學（SPAAC）與含疊氮基的生物分子偶聯。

PEG4間隔鏈提高了水溶性和生物相容性,減少非特異性結合。

該化合物適用于蛋白質、抗體及核酸的標記,適合細胞標記、免疫檢測和多色熒光實驗。

Alexa Fluor488 PEG4 DBCO is a green fluorescent dye conjugate containing a DBCO reactive group.

It can be coupled with azide-containing biomolecules via copper-free click chemistry (SPAAC).

The PEG4 spacer chain enhances water solubility and biocompatibility while reducing nonspecific binding.

This compound is suitable for labeling proteins, antibodies, and nucleic acids, particularly ideal for cell labeling, immunoassays, and multicolor fluorescence experiments.

反應原理

DBCO基團的作用：DBCO（二苯并環辛炔）可通過應變促進的疊氮-炔環加成反應與疊氮基團特異性結合，形成穩定的三唑鍵。

該反應無需銅催化劑，條件溫和且生物相容性高，適用于活細胞標記。

PEG4間隔臂的作用：增強水溶性，減少空間位阻，提高標記效率并降低免疫原性。

AF488熒光基團：提供綠色熒光（激發/發射峰約495/519 nm），適用于488 nm激光的熒光顯微鏡或流式細胞術檢測。

操作步驟

1. 疊氮化修飾靶分子（預活化）

蛋白質疊氮化：使用含疊氮基團的試劑修飾蛋白質的伯胺基（如賴氨酸殘基），反應需在pH 8.0–9.0的緩沖液中進行。

細胞表面疊氮化：通過代謝工程將疊氮基團引入細胞表面糖鏈。

純化：移除未反應的疊氮試劑，避免干擾后續點擊反應。

2. AF488 PEG4 DBCO標記反應

反應條件：

緩沖液：中性至弱堿性緩沖液，避免含游離胺或銨鹽的體系。

溫度與時間：室溫（25°C）反應30–60分鐘，或4°C過夜。

摩爾比：推薦DBCO : 疊氮化物 = 1.5–2 : 1。

操作示例：

將AF488 PEG4 DBCO溶于無水DMSO配成母液。

按比例加入疊氮化靶分子溶液，渦旋混勻。

室溫避光孵育30–60分鐘，輕柔振蕩。

3. 純化偶聯產物

方法：

尺寸排阻層析：使用Sephadex G-25柱去除游離染料及小分子雜質。

磁珠分離：若使用DBCO磁珠，可通過磁性分離并洗滌。

驗證：通過熒光光譜、HPLC或質譜確認標記效率及產物純度。

4. 儲存與使用

短期：4°C避光保存于緩沖液中，添加穩定劑。

長期：分裝凍存于-20°C，避免反復凍融。

應用：標記后的分子可直接用于成像、流式細胞術或功能研究。

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。