5(6)-FITC DA熒光酯酶底物

【????數信息】

英文名稱：5(6)-FITC DA

中文名稱：5(6)-FITC DA熒光酯酶底物

CAS NO：871487-69-3

分子式：C26H19NO7S

分子量：489.49656

狀態：白色固體

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

5(6)-FITC DA熒光酯酶底物是一種細胞可滲透的熒光酯酶底物，通過胞內酯酶水解激活熒光，用于檢測細胞活力和酶活性。

其核心機制是乙酰基水解生成帶負電荷的羧基熒光素，實現熒光信號滯留與定量分析。

功能機制

（1）作為熒光酯酶底物

細胞滲透性：

5(6)-FITC DA 可穿透細胞膜，被細胞內 酯酶（esterases）水解，脫去乙酰基生成熒光產物 5(6)-FITC。

熒光激活：

水解前：無熒光或弱熒光。

水解后：釋放強綠色熒光（激發/發射峰值約 492–504 nm / 518–529 nm）。

雙重檢測功能：

酶活性標志：熒光強度反映細胞內酯酶活性。

細胞膜完整性標志：熒光產物需完整細胞膜才能滯留于細胞內；若膜破損，熒光會泄漏。

（2）作為蛋白標記前體

水解生成的 5(6)-FITC 是 氨基反應性熒光標簽，其異硫氰酸酯基（-N=C=S）可與蛋白質的氨基（如賴氨酸側鏈）共價結合，形成穩定熒光標記。

【實驗步驟（基于類似熒光酯酶底物操作）】

（一）工作液配制

儲存液配制：

用適當溶劑（如DMSO或無水乙醇）溶解粉末，配制成10–50 mM儲存液。

工作液稀釋：

使用前用無血清培養基或緩沖液（如PBS）稀釋儲存液至終濃度1–10 μM（根據細胞類型優化）。

注意：避免含胺緩沖液（如RPMI），防止干擾反應。

（二）細胞標記與孵育

步驟：

去除細胞培養液，用預熱的PBS清洗細胞1–2次。

加入工作液覆蓋細胞，37°C避光孵育15–30分鐘。

離心（400 g, 3–4分鐘），棄上清（貼壁細胞可直接吸除）。

用PBS清洗細胞2次，去除未進入細胞的染料。

（三）檢測方法

熒光顯微鏡：

使用FITC濾光片觀察綠色熒光。

流式細胞術：

用PBS或無血清培養基重懸細胞，在FL1/BL1通道檢測熒光。

酶標儀：

設置激發波長490–497 nm，發射波長515–520 nm，定量熒光強度。

（四）可選步驟（固定與透化）

若需后續抗體標記：

用3.7%多聚甲醛室溫固定15分鐘。

冰丙酮透化10分鐘。

PBS清洗后繼續實驗。

【相關試劑】

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。