pBI221-EGFP 植物表達載體

【??參數信息】

英文名稱：pBI221-EGFP Plant Expression Vector

中文名稱：pBI221-EGFP 植物表達載體

載體用途：植物表達載體

載體大小：4530bp

原核抗性：氨芐青霉su（Ampicillin, Amp）

克隆菌株：DH5α

熒光標記：EGFP（綠色熒光）

啟動子：CaMV 35S

復制子：ori

終止子：NOS

表達水平：高

載體拷貝數：高

5'測序引物：CaMV35S-f

3'測序引物：pEGFP-N-3'

【簡單概述】

pBI221-EGFP 植物表達載體，屬于質粒型載體（Plasmid Vector），大小為4530 bp。其核心設計包含以下元件：

啟動子：CaMV 35S啟動子，驅動外源基因或報告基因的高效表達。

報告基因：增強型綠色熒光蛋白（EGFP），用于實時監測基因表達水平和轉化效率。

篩選標記：

抗性基因：AmpR基因，用于細菌宿主的篩選。

植物篩選標記：部分版本包含β-葡萄糖苷酸酶（GUS）基因，用于植物轉化后的組織化學檢測。

終止子：胭脂堿合成酶終止子（NOS terminator），確保轉錄終止。

復制原點（ori）：支持載體在大腸桿菌和農桿菌中的自主復制。

【實驗步驟】

（一）植物表達載體構建

酶切與片段回收

用限制性內切酶（如SmaI和SacI）雙酶切：

目的基因片段（如GhMT3a）

pBI221-EGFP載體骨架。

瓊脂糖凝膠電泳分離，切膠回收目的片段和線性化載體。

連接反應

按比例混合目的片段與載體（推薦摩爾比3:1），加入DNA連接酶：

例如：10μL體系含1μL T4 DNA連接酶、1μL緩沖液、50ng載體、150ng片段。

16℃連接4小時或過夜。

轉化大腸桿菌

將連接產物加入DH5α感受態細胞，冰浴30分鐘→42℃熱激90秒→冰浴2分鐘。

加入LB培養基，37℃復蘇1小時，涂布含氨芐青霉su（50-100μg/mL）的LB平板。

37℃培養12-16小時，挑取單菌落擴增并提取質粒驗證。

【相關試劑】

FM 2-10膜電位熒光探針

FM 4-64膜電位熒光探針

Alexa Fluor 647-Streptavidin

Alexa Fluor 680-Streptavidin

Fluo-4?Pentapotassium?Salt

CopyCutter Induction Solution 誘導液

Stigmasterol Glucoside 豆甾醇葡萄糖苷

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。