試劑名稱:iFluor 488 Phalloidin,iFluor 488 鬼筆環(huán)肽
儲存:-20℃干燥避光保存至少1年,冰袋運輸。
產(chǎn)地:西安強化生物
一、描述與基本特性:
【分子本質(zhì)】
iFluor 488 鬼筆環(huán)肽是一種熒光標記的鬼筆環(huán)肽,后者是從毒蕈類鬼筆鵝膏中提取的環(huán)狀七肽毒素。
其分子量<2000 Da,尺寸約12-15 ?,確保對肌動蛋白生理特性干擾小。
【作用機制】
特異性結合:高親和力選擇性結合絲狀肌動蛋白 ,不與單體肌動蛋白結合。
穩(wěn)定F-actin:抑制肌動蛋白纖維解聚,降低聚合臨界濃度,并阻斷F-actin的ATP水解活性。
結合計量比:與肌動蛋白亞基按1:1比例結合,非特異性信號可忽略。
【熒光性能】
激發(fā)/發(fā)射波長:493/517 nm(綠色熒光)。
優(yōu)勢:高亮度、強光穩(wěn)定性、高對比度,適用于定性與定量檢測。
兼容性:與熒光蛋白(如GFP)、量子點、其他iFluor™偶聯(lián)物及抗體染色兼容,支持多色成像。
【跨物種適用性】
無物種限制,適用于動物、植物細胞及無細胞體系。
二、應用領域與實驗步驟
【適用樣本類型】
固定/未固定細胞(貼壁或懸浮)、組織切片(甲醛固定或石蠟包埋)、體外無細胞系統(tǒng)。
【標準實驗流程】
樣本制備
固定:4%甲醇游離甲醛(避免甲醇破壞肌動蛋白),室溫10-30分鐘。
透化:0.1% Triton X-100處理3-5分鐘。
封閉:1% BSA減少非特異性結合(可選)。
染色步驟
工作液配制:1 μL原液(1000×) + 1 mL PBS(含1% BSA),避光現(xiàn)配。
孵育:覆蓋樣本,避光室溫20-90分鐘(時間依細胞類型優(yōu)化)。
洗滌:PBS洗3次,每次5分鐘。
復染與封片
核染色:DAPI(100 nM)染30秒。
封片:抗淬滅封片劑(如Fluoromount-G™),4℃避光保存可達6個月。
檢測設備
熒光顯微鏡/共聚焦顯微鏡,濾光片:iFluor 488(Ex/Em=493/517 nm)及DAPI(364/454 nm)。
【特殊應用場景】
多色成像:可與抗體共染色(添加于一抗/二抗孵育步驟)。
活細胞研究:低濃度下招募胞質(zhì)肌動蛋白形成穩(wěn)定聚合體,不干擾應力纖維。
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用于科研相關領域,不能用于人體實驗!
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