Coelenterazine H（腔腸素 H）

試劑名稱：Coelenterazine H（腔腸素 H）

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

CAS：50909-86-9

分子式：C26H21N3O2

分子量：407.46

一、描述與基本特性：

Coelenterazine H（腔腸素 H）是天然腔腸素的去羥基衍生物，外觀為黃色固體，可溶于甲醇、乙醇、丙二醇，但不溶于 DMSO。

光學(xué)特性：紫外吸收峰（λmax）為 433 nm，熒光發(fā)射峰為 466 nm（藍(lán)光）。

腔腸素 H 是雙功能分子，兼具兩種核心作用：

熒光素酶底物：

作為海腎熒光素酶（Rluc）、高斯熒光素酶（Gluc）等的作用底物，在氧氣存在下被氧化，產(chǎn)生高能中間體并發(fā)射 450–480 nm 藍(lán)光，發(fā)光強(qiáng)度為天然腔腸素的 10–20 倍 。

光蛋白輔因子：

與水母發(fā)光蛋白結(jié)合形成復(fù)合物。當(dāng)鈣離子結(jié)合（需 3 個(gè)鈣離子）時(shí)，腔腸素 H 被氧化生成 Coelenteramide，釋放 CO2和 466 nm 藍(lán)光，實(shí)現(xiàn)對(duì)鈣離子濃度的超靈敏檢測(cè)。

二、作用機(jī)制

腔腸素 H 是海洋生物發(fā)光系統(tǒng)的核心底物，其作用機(jī)制主要依賴兩類生物分子：熒光素酶和發(fā)光蛋白。

1. 作為熒光素酶底物（報(bào)告基因分析）

發(fā)光原理：

在氧氣存在下，熒光素酶催化腔腸素 H 氧化，生成高能量中間體 Coelenteramide，同時(shí)釋放光子（藍(lán)光，峰值波長 466 nm）。

優(yōu)勢(shì)：

發(fā)光強(qiáng)度比天然腔腸素 高10倍以上，靈敏度提升。

無需ATP，適用于活體成像和體內(nèi)報(bào)告基因檢測(cè)。

2. 作為水母發(fā)光蛋白輔因子（鈣離子檢測(cè)）

鈣敏感機(jī)制：

腔腸素 H 與水母發(fā)光蛋白（Aequorin）結(jié)合形成復(fù)合物。當(dāng) Ca2+ 結(jié)合該復(fù)合物時(shí)，觸發(fā)腔腸素 H 氧化發(fā)光，發(fā)光強(qiáng)度與 Ca2+濃度呈 三次冪正相關(guān)。

檢測(cè)優(yōu)勢(shì)：

對(duì) Ca2+ 的敏感性高于天然腔腸素，可檢測(cè) 0.1 μM ~ >100 μM 的微小濃度變化。

無自體熒光干擾，背景信號(hào)低，適用于活細(xì)胞鈣振蕩監(jiān)測(cè)。

3. 非酶促氧化反應(yīng)（活性氧檢測(cè)）

在 活性氧（ROS） 存在下，腔腸素 H 可發(fā)生自發(fā)氧化并發(fā)光，用于定量細(xì)胞/組織內(nèi) ROS 水平。

4. 生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）

腔腸素 H 被熒光素酶氧化產(chǎn)生的藍(lán)光（~466 nm）可激發(fā)鄰近的 熒光受體蛋白（如GFP、EYFP），實(shí)現(xiàn)能量轉(zhuǎn)移（發(fā)射綠光，~530 nm）。

應(yīng)用：

研究蛋白質(zhì)相互作用（如GPCR信號(hào)通路）。

消除細(xì)胞數(shù)量/類型差異對(duì)信號(hào)的干擾，適用于藥物高通量篩選。

以上由西安強(qiáng)化生物小編xxn整理

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