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501維生素B12檢測高效相色譜儀

Name: 501維生素B12檢測高效相色譜儀
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產品簡介

501維生素B12檢測高效相色譜儀

詳細介紹

501維生素B12檢測高效相色譜儀

1 簡介

本文參照GB/T 17819-1999標準采用了501系列高效液相色譜法測定維生素預混料中維生素B12的方法。501高效液相色譜儀適用于維生素預混料、維生素B12預混制劑中維生素B12的測定。檢測范圍為每千克樣品中維生素B12含量大于0.25mg,

2 方法原理

試樣中維生素B12用水提取，經高效液相色譜反相柱分離，其峰面積與維生素B12的含量成正比

3 試劑和材料

本標準所用試劑除特殊注明外，均為優級純，水為去離子水。

3.1 乙睛:色譜純。

3.2 正磷酸溶液

3.3 25%乙醇溶液

3.4 維生素B12標準溶液。

3.4.1 維生素B12標準貯備溶液:準確稱取0.1000g維生素B12純品(符合USP),溶解于100Ml乙醇溶液(3.3)中，并稀釋定容至刻度，搖勻。該標準貯備液每毫升含維生素B12 1mg.

3.4.2 維生素B12標準工作液:準確吸取維生素B12標準貯備液(3.4.1)1mL于50Ml容量瓶中，用移動相稀釋定容刻度，搖勻。該標準工作液1Ml含維生素B12 2ug

4 儀器、設備

4.1 實驗室常用設備。

4.2 超聲波水浴。

4.3 高效液相色譜儀:進口手動進樣器（自動進樣器）,501高效液相色譜儀、紫外可調波長檢驗器

4.4 超純水裝置

4.5 離心機:3000r/min.

5 試樣制備

取具有代表性樣品至少500g，用四分法縮分至100g，粉碎，全部過0.28mm 孔篩混勻，裝入樣品瓶內密閉，避光低溫保存備用。

6 分析步驟

6.1 提取

6.1.1 維生素預混料中維生素B12的提取

稱取試樣 2-3g (精確至士0.0001g )，置于100mL棕色容量瓶中，加約60mL去離子水，在超聲波水浴中超聲提取15min，取出，用去離子水定容至刻度，混勻，過濾，濾液過0.45um濾膜，供高效液相色譜儀分析。

6.1.2 維生素B12制劑(1%-2%)的提取

稱取試樣1g(精確至±0.0001g)于100mL棕色容量瓶中，加人約60mL去離子水，在超聲波水

浴中超聲提取10min，取出用去離子水定容過濾。精確吸取1.00mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用去離子水定容至刻度，該液通過0.45um濾膜過濾，供高效液相色譜儀分析

6.2 測定步驟

6.2.1 色譜條件

柱子 :u-Bondpak NH2,粒度5um,3.9mm×300mm。Vertex NH2色譜柱，5um，4.6×250mm

柱溫 :30℃。

流動相 : 3%正磷酸水溶液260mL與700mL乙膀混合，超聲脫氣。

流速 : 1.7mL/min,

檢測波長 :361nm。

6.2.2 定量測定

按高效液相色譜儀說明書調整儀器操作參數，用兩次以上相應標準工作液，對系統進行校正。

將通過0.45um濾膜的樣液(6.1.1)依次分裝于自動進樣小瓶中，依外標法上液相色譜儀測定

6.2.3 也可采用反相離子對高效液相色譜測定維生素B12的方法(見附錄A)

7 測定結果的計算

測定結果按式(1)計算w1=Pi×V×pi×Vst/Pn×m×Vi

式中w1一每千克樣品中維生素B12的含量，mg;

m- 試樣質量，g;

Vi-試樣溶液進樣體積,uL;

Pi-試樣溶液峰面積值;

V-試樣稀釋的體積，mL;

Pi-標準溶液濃度，ug/mL;

Vst-標準溶液進樣體積,uL;

Pn-標準溶液峰面積平均值。

每個試樣取兩份試料進行平行測定，以其算術平均值為測定結果。結果表示到每千克樣品中維生素B12 O.01mg

8 允許差

同一分析者對同一試樣同時兩次平行測定結果的相對偏差應不大于15%

反相離子對高效液相色譜測定預混料中維生案B12

A1 原理

試樣中維生素B12經水提取后，注人反相色譜柱上，由于輸入了有機的反相離子對四丁基磷酸銨(PIC A)和己烷磺酸鈉(PIC-B6)溶掖，維生素B12的陽離子與移動相中陰離子形成離子偶化合物，在移動過程中與固定相分開達到分離.

A2 試劑和材料

1 甲醇(優級純)。2 磷酸。

3 四丁基磷酸銨(PIC A),4 己烷磺酸鈉(PIC-B6),

A3 測定色譜條件

柱子 :150 m×4.0mm(內徑)不銹鋼柱。VertexC18色譜柱，250mm×4.6，5um進口

固定相 :u-Bondpak C18(ODS)粒度5um,

移動相 :甲醇-水(250+750)約980mL，加入PICA/PICB6(各一小瓶)20mL，用上述25%甲醇水定

容至1L,混勻，用磷酸調節pH3,流速 :1ml/min,

柱溫 :室溫檢測器 :紫外檢測器，使用波長365nm,

進樣量 : 20uL,保留時間 :約7.0min

關鍵詞：維生素B12液相色譜儀，飼料檢測高效液相色譜儀，維生素預混料中維生素B12測定高效相色譜法，國產液相色譜儀，維生素B12高效液相色譜法。

關鍵詞：液相色譜標準溶液離心機色譜柱

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